रैट मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 8 / न्यूट्रोफिल कोलेजनेज (एमएमपी-8) एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोएसे (एलिसा) निर्देश

हमारी कंपनी एलिसा किट की आपूर्तिकर्ता है। कीमत उचित है. प्री-सेल, इन-सेल और आफ्टर-सेल सेवाएँ आपकी सेवा में हैं। निःशुल्क परीक्षण सेवा प्रदान करें, कृपया हमें कॉल करें!

रैट मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 8 / न्यूट्रोफिल कोलेजनेज (एमएमपी-8) एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोएसे (एलिसा)

किट अनुदेश पुस्तिका

यह अभिकर्मक केवल अनुसंधान उपयोग के लिए है

उद्देश्य: इस किट का उपयोग चूहे के सीरम, प्लाज्मा और संबंधित तरल नमूनों में मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 8 / न्यूट्रोफिल कोलेजनेज (एमएमपी-8) की सामग्री निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

प्रायोगिक सिद्धांत:

यह किट नमूने में रैट मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 8 / न्यूट्रोफिल कोलेजनेज (एमएमपी-8) के स्तर को निर्धारित करने के लिए डबल एंटीबॉडी सैंडविच विधि का उपयोग करती है। ठोस-चरण एंटीबॉडी तैयार करने के लिए माइक्रोपोरस प्लेटों को शुद्ध चूहे मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 8 / न्यूट्रोफिल कोलेजनेज (एमएमपी -8) एंटीबॉडी के साथ लेपित किया गया था, और मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 8 / को मोनोक्लोनल एंटीबॉडी-लेपित माइक्रोवेल्स में अनुक्रम न्यूट्रोफिल कोलेजनेज (एमएमपी -8) में जोड़ा गया था, फिर एचआरपी-लेबल मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 8 / न्यूट्रोफिल कोलेजनेज के साथ जोड़ा गया था। (एमएमपी-8) एंटीबॉडी एक एंटीबॉडी-एंटीजन-एंजाइम लेबल एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनाने के लिए, पूरी तरह से धोने के बाद रंग विकसित करने के लिए सब्सट्रेट टीएमबी जोड़ें। टीएमबी एचआरपी एंजाइम के उत्प्रेरण के तहत नीले रंग में और एसिड की कार्रवाई के तहत अंतिम पीले रंग में परिवर्तित हो जाता है। नमूने में रंग की गहराई मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनेज 8 / न्यूट्रोफिल कोलेजनेज (एमएमपी-8) के साथ सकारात्मक रूप से सहसंबद्ध है। अवशोषण (ओडी मान) को 450 एनएम की तरंग दैर्ध्य पर एक माइक्रोप्लेट रीडर के साथ मापा गया था, और नमूने में चूहे मैट्रिक्स मेटालोप्रोटीनस 8 / न्यूट्रोफिल कोलेजनेज (एमएमपी -8) की एकाग्रता की गणना एक मानक वक्र द्वारा की गई थी।

नमूना प्रसंस्करण और आवश्यकताएँ:

1. सीरम: कमरे के तापमान पर रक्त प्राकृतिक रूप से 10-20 मिनट के लिए जमा होता है, लगभग 20 मिनट (2000-3000 आरपीएम) के लिए सेंट्रीफ्यूज होता है। यदि भंडारण के दौरान कोई अवक्षेप दिखाई देता है तो सतह पर तैरनेवाला को सावधानीपूर्वक एकत्र करें और फिर से अपकेंद्रित्र करें।

2. मूत्र: एक बाँझ ट्यूब में एकत्र किया गया और लगभग 20 मिनट (2000-3000 आरपीएम) के लिए सेंट्रीफ्यूज किया गया। सतह पर तैरनेवाला सावधानी से इकट्ठा करें। यदि भंडारण के दौरान कोई अवक्षेप बनता है, तो दोबारा सेंट्रीफ्यूज करें। फुफ्फुस और जलोदर, मस्तिष्कमेरु द्रव संदर्भ कार्यान्वयन।

3. प्लाज्मा: नमूने की आवश्यकताओं के अनुसार ईडीटीए या सोडियम साइट्रेट को थक्कारोधी के रूप में चुना जाना चाहिए। 10-20 मिनट तक मिश्रण करने के बाद, लगभग 20 मिनट (2000-3000 आरपीएम) के लिए सेंट्रीफ्यूज करें। सतह पर तैरनेवाला सावधानी से इकट्ठा करें। यदि भंडारण के दौरान कोई अवक्षेप बनता है, तो इसे फिर से सेंट्रीफ्यूज किया जाना चाहिए।

4. सेल कल्चर सतह पर तैरनेवाला: स्रावित घटकों का पता लगाते समय, एक बाँझ ट्यूब के साथ इकट्ठा करें। लगभग 20 मिनट (2000-3000 आरपीएम) के लिए अपकेंद्रित्र। सतह पर तैरनेवाला सावधानी से इकट्ठा करें। कोशिकाओं के अंदर घटकों का पता लगाने पर, पीबीएस (PH7.2-7.4) के साथ सेल निलंबन को पतला करें, और सेल एकाग्रता लगभग 1 मिलियन / एमएल तक पहुंच जाएगी। बार-बार जमने और पिघलने से कोशिकाएं नष्ट हो जाती हैं और अंतःकोशिकीय घटक निकल जाते हैं। लगभग 20 मिनट (2000-3000 आरपीएम) के लिए अपकेंद्रित्र। सतह पर तैरनेवाला सावधानी से इकट्ठा करें। यदि भंडारण के दौरान कोई अवक्षेप बनता है, तो इसे फिर से सेंट्रीफ्यूज किया जाना चाहिए।

5. नमूने को व्यवस्थित करें: नमूने को काटने के बाद उसका वजन करें। पीबीएस, PH7.4 की एक निश्चित मात्रा जोड़ें। बाद में उपयोग के लिए तुरंत फ्रीज करें और तरल नाइट्रोजन के साथ बचाकर रखें। नमूना पिघलने के बाद, यह अभी भी 2-8 डिग्री सेल्सियस का तापमान बनाए रखता है। एक निश्चित मात्रा में पीबीएस (PH7.4) जोड़ें और एक मैनुअल या होमोजेनाइज़र के साथ नमूने को समरूप बनाएं। लगभग 20 मिनट (2000-3000 आरपीएम) के लिए अपकेंद्रित्र। सतह पर तैरनेवाला सावधानी से इकट्ठा करें। अंशांकन के बाद, एक हिस्से का परीक्षण किया जाना है, और बाकी को भविष्य में उपयोग के लिए फ्रीज कर दिया गया है।

6. नमूना संग्रह के बाद यथाशीघ्र निकाला जाना चाहिए। निष्कर्षण प्रासंगिक साहित्य के अनुसार किया जाना चाहिए। प्रयोग निष्कर्षण के बाद यथाशीघ्र किया जाना चाहिए। यदि परीक्षण तुरंत नहीं किया जा सकता है, तो नमूने को -20 ℃ पर संग्रहित किया जा सकता है, लेकिन बार-बार जमने और पिघलने से बचना चाहिए।

7. NaN3 युक्त नमूने का पता नहीं लगाया जा सकता क्योंकि NaN3 हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (HRP) की गतिविधि को रोकता है।

सावधानियां:

1. क्रिस्टल सांद्रित वाशिंग तरल में अवक्षेपित हो सकते हैं, जिन्हें गर्म किया जा सकता है और तनुकरण के दौरान पानी के स्नान में घोला जा सकता है, और धोने के दौरान परिणाम प्रभावित नहीं होंगे।

2. क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए सीलिंग फिल्म एक बार उपयोग तक सीमित है।

3. नमूना जोड़ने के प्रत्येक चरण में सैंपलर का उपयोग किया जाना चाहिए, और परीक्षण त्रुटियों से बचने के लिए सटीकता की नियमित जांच की जानी चाहिए। नमूना लेने के समय को 5 मिनट के भीतर नियंत्रित करना सबसे अच्छा है। यदि कई नमूने हैं, तो नमूने जोड़ने के लिए वॉली गन का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।

4. प्रशीतित वातावरण से बाहर निकालने से पहले किट को 15-30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर संतुलित किया जाना चाहिए। यदि एंजाइम लेबल लेपित प्लेट खुली हुई है, तो पट्टी को एक सीलबंद बैग में संग्रहित किया जाना चाहिए।

5. कृपया प्रत्येक माप के एक ही समय में एक मानक वक्र बनाएं, दोहरा छेद बनाना सबसे अच्छा है। यदि नमूने में परीक्षण पदार्थ की सामग्री बहुत अधिक है (नमूने का OD मान मानक कुएं के पहले कुएं के OD मान से अधिक है), तो कृपया पहले इसे नमूना मंदक के एक निश्चित गुणक (n बार) के साथ पतला करें और फिर इसे निर्धारित करें। गणना करते समय, कृपया कुल तनुकरण गुणक (× n × 5) से गुणा करें।

6. कृपया सब्सट्रेट को प्रकाश से दूर रखें।

7. निर्देशों का सख्ती से पालन करें, और परीक्षण के परिणाम माइक्रोप्लेट रीडर द्वारा निर्धारित किए जाने चाहिए।

8. सभी नमूनों, धोने वाले तरल पदार्थों और विभिन्न अपशिष्टों को संक्रामक एजेंट के रूप में माना जाना चाहिए।

9. इस अभिकर्मक के विभिन्न बैचों के घटकों को मिश्रित नहीं किया जाएगा।

10. यदि अंग्रेजी मैनुअल से कोई मतभेद हो तो अंग्रेजी मैनुअल मान्य होगा।

किट संरचना:

किट रचना

48 छेद विन्यास

96-अच्छी तरह से विन्यास

बचाना

निर्देश

1 सर्विंग

1 सर्विंग

सीलिंग फिल्म

2 टुकड़े (48)

2 टुकड़े (96)

सीलबंद बैग

1

1

एंजाइम लेपित प्लेट

1×48

1×96

2-8 ℃ पर स्टोर करें

मानक उत्पाद: 2700ng/L

0.5 मिली × 1 बोतल

0.5 मिली × 1 बोतल

2-8 ℃ पर स्टोर करें

मानक तनुकरण

1.5 मिली × 1 बोतल

1.5 मिली × 1 बोतल

2-8 ℃ पर स्टोर करें

एंजाइम अभिकर्मक

3 मिली × 1 बोतल

6 मिली × 1 बोतल

2-8 ℃ पर स्टोर करें

नमूना मंदक

3 मिली × 1 बोतल

6 मिली × 1 बोतल

2-8 ℃ पर स्टोर करें

डेवलपर एक तरल

3 मिली × 1 बोतल

6 मिली × 1 बोतल

2-8 ℃ पर स्टोर करें

डेवलपर बी तरल

3 मिली × 1 बोतल

6 मिली × 1 बोतल

2-8 ℃ पर स्टोर करें

समाधान रोकें

3 मिली × 1 बोतल

6 मिली × 1 बोतल

2-8 ℃ पर स्टोर करें

सांद्रित धुलाई तरल

(20 मिली × 20 बार) × 1 बोतल

(20मिली × 30 बार) × 1 बोतल

2-8 ℃ पर स्टोर करें

कदम

1. नमूना जोड़ें: रिक्त कुओं को अलग से स्थापित करें (रिक्त नियंत्रण कुओं में नमूने और एंजाइम-लेबल अभिकर्मक नहीं जोड़े जाते हैं, बाकी चरण समान हैं) और नमूना कुओं का परीक्षण किया जाना है। एंजाइम-लेपित प्लेट के परीक्षण नमूने में 40μl नमूना पतला जोड़ें, और फिर परीक्षण किए जाने वाले नमूने का 10μl जोड़ें (नमूने का अंतिम पतलापन 5 गुना है)। नमूना जोड़ें और नमूने को माइक्रोप्लेट के कुएं के नीचे जोड़ें, कोशिश करें कि कुएं की दीवार को न छुएं, मिश्रण करने के लिए धीरे से हिलाएं।

2. मानक उत्पादों का पतलापन और लोडिंग: एंजाइम-लेपित प्लेट पर 10 मानक कुएं सेट करें, पहले और दूसरे कुएं में मानक उत्पादों के 100 μl जोड़ें, और फिर पहले और दूसरे कुएं में मानक उत्पादों के 50 μl पतला जोड़ें, अच्छी तरह मिलाएं; फिर पहले कुएं और दूसरे कुएं से 100μl लें और उन्हें क्रमशः तीसरे और चौथे कुएं में डालें, और फिर क्रमशः तीसरे और चौथे कुएं में 50μl मानक मंदक डालें, अच्छी तरह मिलाएं; फिर तीसरे और चौथे कुएं में से प्रत्येक में 50μl लें और इसे त्याग दें, फिर पांचवें और छठे कुएं में प्रत्येक में 50μl डालें, और फिर क्रमशः पांचवें और छठे कुएं में 50ul मानक कमजोर पड़ने वाला घोल डालें और अच्छी तरह मिलाएं; मिश्रण के बाद, पांचवें और छठे कुएं से 50μl लें और उन्हें क्रमशः सातवें और आठवें कुएं में जोड़ें। फिर क्रमशः सातवें और आठवें कुएं में 50μl मानक तनुकरण घोल डालें। आठ कुओं से 50μl लें और उन्हें नौवें और दसवें कुओं में जोड़ें। फिर नौवें और दसवें कुएं में 50μl मानक तनुकरण घोल डालें। मिश्रण के बाद, नौवें और दसवें कुएं से 50μl लें और त्यागें। (पतला करने के बाद, प्रत्येक कुएं की मात्रा 50μl है, और सांद्रता 1800ng/L, 1200ng/L, 600ng/L, 300ng/L, 150ng/L है)

3. इनक्यूबेशन: प्लेट को सीलिंग प्लेट से सील करें और 30 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें।

4. मिश्रण मिश्रण: आसुत जल के साथ 30 गुना (48T का 20 गुना) सांद्रित वाशिंग तरल को पतला करें और फिर उपयोग करें।

5. धुलाई: सीलिंग फिल्म को सावधानी से छीलें, तरल को हटा दें, घुमाकर सुखाएं, प्रत्येक कुएं को धोने वाले तरल से भरें, इसे 30 सेकंड तक खड़े रहने दें और फिर हटा दें, 5 बार दोहराएं और थपथपाकर सुखाएं।

6. इन्क्यूबेशन: ऑपरेशन 3 के समान है।

7. धुलाई: ऑपरेशन 5 के समान है।

8. रंग विकास: प्रत्येक कुएं में 50μl डेवलपर ए जोड़ें, और फिर 50μl डेवलपर बी जोड़ें, धीरे से मिलाएं, और 15 मिनट के लिए अंधेरे में 37 डिग्री सेल्सियस पर विकसित करें।

9. एंजाइम जोड़ें: खाली कुएं को छोड़कर, प्रत्येक कुएं में 50μl एंजाइम लेबल अभिकर्मक जोड़ें।

10. समाप्ति: प्रतिक्रिया को रोकने के लिए प्रत्येक कुएं में 50μl स्टॉप सॉल्यूशन मिलाएं (इस समय नीला रंग पीला हो जाएगा)।

11. निर्धारण: शून्य और 450 एनएम तरंग दैर्ध्य पर खाली एयर कंडीशनर के साथ अनुक्रम में प्रत्येक कुएं के अवशोषण (ओडी मान) को मापें। स्टॉप सॉल्यूशन जोड़ने के 15 मिनट के भीतर माप किया जाना चाहिए।

भंडारण की स्थिति और वैधता अवधि:

1. किट को स्टोर करें: 2-8 ℃।

2. वैधता: 6 महीने

किट प्रदर्शन:

1. नमूने के रैखिक प्रतिगमन और अपेक्षित एकाग्रता के बीच सहसंबंध गुणांक आर 0.95 से ऊपर है।

2. बैच और अनुमोदन क्रमशः 9% और 11% से कम होगा

परीक्षा रेंज:

100ng/L -2000ng/L

गणना:

मानक की सांद्रता को भुज के रूप में और OD मान को कोटि के रूप में लेते हुए, समन्वय कागज पर एक मानक वक्र बनाएं, और नमूने के OD मान के अनुसार मानक वक्र से संबंधित सांद्रता ज्ञात करें; फिर इसे तनुकरण कारक से गुणा करें; OD मान के साथ मानक वक्र के रैखिक प्रतिगमन समीकरण की गणना करें, नमूने के OD मान को समीकरण में प्रतिस्थापित करें, नमूना एकाग्रता की गणना करें, और नमूने की वास्तविक एकाग्रता प्राप्त करने के लिए इसे कमजोर पड़ने वाले कारक से गुणा करें।