माउस कोलेजनेज़ I (कोलेजेनेज़ I) मात्रात्मक जांच किट (एलिसा)

माउस कोलेजनेज़ I (कोलेजेनेज़ I) मात्रात्मक जांच किट (एलिसा)

उपयोगकर्ता की मार्गदर्शिका

【किट का नाम】

माउस कोलेजनेज़ I (कोलेजेनेज़ I) मात्रात्मक जांच किट (एलिसा)

【किट का उपयोग】

माउस सीरम, प्लाज्मा और संबंधित तरल नमूनों में कोलेजनेज़ I (कोलेजेनेज़ I) का मात्रात्मक पता लगाना।

【पता लगाने का सिद्धांत】

यह किट डबल एंटीबॉडी वन-स्टेप सैंडविच एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) का उपयोग करती है। मानक, परीक्षण नमूना और एंजाइम-लेबल कार्यशील समाधान को माउस कोलेजनेज़ I (कोलेजेनेज़ I) एंटीबॉडी के साथ पूर्व-लेपित पारदर्शी एंजाइम-लेबल प्लेट में जोड़ा गया था, और पर्याप्त समय के लिए ऊष्मायन के बाद, अनबाउंड घटकों को धोया गया था। डेवलपर ए और बी को बारी-बारी से जोड़ें, डेवलपर (टीएमबी) हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (एचआरपी) द्वारा उत्प्रेरित एक नीले उत्पाद में परिवर्तित हो जाता है, और एक एसिड की कार्रवाई के तहत पीला हो जाता है। कोलेजनेज़ I (कोलेजेनेज़ I) एकाग्रता सकारात्मक रूप से सहसंबद्ध थी। OD मान 450 एनएम तरंग दैर्ध्य पर मापा गया था। मानक और नमूने के OD मान के आधार पर, नमूने में माउस कोलेजनेज़ I (कोलेजेनेज़ I) की सामग्री की गणना की गई थी।

【किट की संरचना】

1

एंजाइम लेपित प्लेट

12 छेद × 4 पट्टियाँ

7

डेवलपर एक तरल

3 एमएल

2

मानक उत्पाद: 96ng/mL

0.6 एमएल

8

डेवलपर बी तरल

3 एमएल

3

20 गुना संकेंद्रित वाशिंग तरल

15एमएल

9

समाधान रोकें

3 एमएल

4

मानक तनुकरण

3 एमएल

10

निर्देश

1 सर्विंग

5

नमूना मंदक

3 एमएल

11

सीलिंग फिल्म

2 शीट

6

एंजाइम अभिकर्मक

5एमएल

12

सीलबंद बैग

1

टिप्पणियाँ: मानक उत्पाद को मानक उत्पाद मंदक के साथ इस क्रम में पतला किया जाता है: 96, 48, 24, 12, 6, 3 एनजी/एमएल

[अभिकर्मकों और उपकरणों की आवश्यकता है लेकिन उपलब्ध नहीं कराए गए]

1. 37 ℃ थर्मोस्टेट

2. मानक विशिष्टता माइक्रोप्लेट रीडर

3. परिशुद्ध पिपेट और डिस्पोजेबल युक्तियाँ

4. आसुत जल

5. डिस्पोजेबल टेस्ट ट्यूब

6. अवशोषक कागज

【कदम】

1. तैयारी: रेफ्रिजरेटर से अभिकर्मक किट निकालें और 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर पुनः संतुलित करें।

2. मिश्रण मिश्रण: आसुत जल के साथ 20 गुना सांद्रित धुलाई समाधान को मूल घोल में पतला करें।

3. परीक्षण के लिए मानक उत्पाद और नमूने जोड़ें: पर्याप्त संख्या में एंजाइम-लेपित प्लेटें लें और उन्हें फ्रेम पर लगाएं। मानक कुओं, परीक्षण के लिए नमूना कुओं और खाली नियंत्रण कुओं की स्थापना करें, मानक कुओं में प्रत्येक कुएं की स्थिति रिकॉर्ड करें। मानक का 50μL जोड़ें; अच्छी तरह से परीक्षण किए जाने वाले नमूने में 10μL जोड़ें, और फिर नमूना मंदक का 40μL जोड़ें (अर्थात, नमूना 5 गुना पतला है); प्रत्येक कुएं में 100μL एंजाइम-लेबल कार्यशील समाधान जोड़ें; कोई खाली नियंत्रण नहीं.

4. ऊष्मायन: 60 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान या थर्मोस्टेट में ऊष्मायन करें।

5. प्लेट धोएं: तरल को हटा दें, अवशोषक कागज पर थपथपाकर सुखाएं, प्रत्येक कुएं को धोने वाले तरल से भरें, 1 मिनट तक खड़े रहने दें, धोने वाले तरल को हिलाएं, अवशोषक कागज पर थपथपाकर सुखाएं, इस तरह से 5 बार धोने को दोहराएं बोर्ड धोने के निर्देश)।

6. रंग विकास: प्रत्येक कुएं में 50 μL डेवलपर ए समाधान जोड़ें, फिर 50 μL डेवलपर बी समाधान जोड़ें, और 15 मिनट के लिए अंधेरे में 37 डिग्री सेल्सियस पर रंग विकसित करें।

7. समाप्ति: एंजाइम लेबलिंग प्लेट को हटा दें और प्रतिक्रिया को रोकने के लिए प्रत्येक कुएं में 50μL स्टॉप सॉल्यूशन डालें (रंग नीले से पीले रंग में बदल जाता है)।

8. निर्धारण: रिक्त छिद्रों को शून्य करें, और समाप्ति के 15 मिनट के भीतर, 450 एनएम की तरंग दैर्ध्य के साथ प्रत्येक कुएं के अवशोषण (ओडी मान) को मापें।

9. गणना: मानक उत्पाद की सांद्रता और संबंधित OD मान के अनुसार, मानक वक्र के रैखिक प्रतिगमन समीकरण की गणना करें, और फिर नमूने के OD मान के अनुसार प्रतिगमन समीकरण पर संबंधित नमूना एकाग्रता की गणना करें। आप गणना के लिए विभिन्न एप्लिकेशन सॉफ़्टवेयर का भी उपयोग कर सकते हैं। अंतिम सांद्रता तनुकरण कारक से गुणा की गई वास्तविक मापी गई सांद्रता है।

[नमूना आवश्यकताएँ]

1. नमूने में सोडियम एजाइड (NaN3) नहीं हो सकता क्योंकि सोडियम एजाइड (NaN3) हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज (HRP) का अवरोधक है।

2. नमूना संग्रह के बाद यथाशीघ्र निकाला जाना चाहिए। निष्कर्षण प्रासंगिक साहित्य के अनुसार किया जाना चाहिए। प्रयोग निष्कर्षण के बाद यथाशीघ्र किया जाना चाहिए। यदि परीक्षण तुरंत नहीं किया जा सकता है, तो नमूने को -20 ℃ पर संग्रहित किया जा सकता है, लेकिन बार-बार जमने और पिघलने से बचना चाहिए।

3. नमूना हेमोलिसिस और कणों के बिना, पूरी तरह से सेंट्रीफ्यूज किया जाना चाहिए।

【सावधानियां】

1. प्रयोग निर्देशों के अनुसार कड़ाई से किया जाता है, और प्रयोग का परिणाम माइक्रोप्लेट रीडर की रीडिंग द्वारा निर्धारित किया जाना चाहिए।

2. यदि खोलने के बाद एंजाइम-लेबल लेपित बोर्ड का उपयोग नहीं किया जाता है, तो इसे एक सीलबंद बैग में डाल दिया जाना चाहिए और तुरंत शुष्कक के साथ जोड़ा जाना चाहिए।

3. यह अनुशंसा की जाती है कि सभी मानकों, नमूनों और रिक्त नियंत्रणों का दो प्रतियों में परीक्षण किया जाए, और प्रयोगात्मक त्रुटि को कम करने के लिए औसत मूल्य लिया जाए।

4. यदि रंग बहुत हल्का है, तो सब्सट्रेट ऊष्मायन समय को ठीक से बढ़ाया जा सकता है।

5. क्रॉस-संदूषण से बचने के लिए, मानक, नमूना और रिक्त नियंत्रण को प्रत्येक अतिरिक्त के लिए एक टिप के साथ प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए; सामान्य घटकों जैसे एंजाइम कार्यशील समाधान, नमूना मंदक और सब्सट्रेट को कैंटिलीवर द्वारा जोड़ा जाना चाहिए, और माइक्रोवेल को नहीं छूना चाहिए; सीलिंग फिल्म का पुन: उपयोग न करें।

6. किट का उपयोग वारंटी अवधि के भीतर किया जाता है, और अभिकर्मकों के विभिन्न बैचों को मिश्रित नहीं किया जाना चाहिए।

7. सब्सट्रेट बी प्रकाश के प्रति संवेदनशील है और लंबे समय तक प्रकाश के संपर्क में रहने से बचता है।

[संचालन प्रक्रियाओं का सारांश]

अभिकर्मक, नमूने और मानक तैयार करें

तैयार नमूने, मानक और एंजाइम मानक कार्यशील समाधान जोड़ें, और 60 मिनट के लिए 37 ℃ पर प्रतिक्रिया करें

प्लेट को 5 बार धोएं, रंग विकसित करने वाले घोल ए और बी डालें और 15 मिनट के लिए 37 ℃ पर विकसित करें

स्टॉप समाधान जोड़ें

15 मिनट के भीतर OD मान पढ़ें

गणना

【परीक्षा रेंज】

3-96एनजी/एमएल

【विनिर्देश】

48 सर्विंग्स/बॉक्स

【भंडारण】

प्रकाश और नमी से सुरक्षित 2-8 ℃ पर स्टोर करें।

【वैधता】

6 महीने